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產(chǎn)品名稱:

禽偏肺病毒(aMPV)熒光PCR核酸檢測試劑盒

產(chǎn)品型號: 產(chǎn)品時間: 2023-03-08
禽偏肺病毒(aMPV)熒光PCR核酸檢測試劑盒適用于檢測全血等樣本中的禽偏肺病毒,用于禽偏肺病毒感染的輔助診斷,其檢測結(jié)果僅供參考。
本試劑盒用一對禽偏肺病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR技術(shù)對禽偏肺病毒的核酸進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

產(chǎn)品概述

禽偏肺病毒(aMPV)熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:禽偏肺病毒(aMPV)?核酸擴增檢測試劑盒(PCR 熒光探針法)

Name :Avian metapneumonia virus (aMPV) nucleic acid amplification kit (PCR fluorescence probe method)

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測全血等樣本中的禽偏肺病毒,用于禽偏肺病毒感染的輔助診斷,其檢測結(jié)果僅供參考。

【檢驗原理】

本試劑盒用一對禽偏肺病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光 PCR 技術(shù)對禽偏肺病毒的核酸進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

5.2結(jié)果判斷

陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線;

可疑:檢測通道 35.0<Ct 值≤37,建議重復(fù)檢測,如果檢測通道仍為 35.0<Ct

值≤37,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;

陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。

【標本要求】

標本采集:用注射器取血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管

保存運輸:上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過

6 個月,標本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1樣本前處理

取抗凝血下層血細胞 50uL,加入 100uL 雙蒸水吹勻

1.2DNA 提取

1) 對上述處理好的標本加入等體積核酸提取液(固體標本加入50uL核酸提取液),

100℃恒溫處理 10 分鐘,13,000 rpm 離心 5 分鐘,取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5ml

EP 管,-20℃保存;

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 DNA 提取試劑

盒(離心柱提取法),請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

2. 試劑配制(試劑準備區(qū))

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑 YP 反應(yīng)液 酶液

用量(樣本數(shù)為 N) 20μl 1μl

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl,分別加入相應(yīng)的反

應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR 擴增(核酸擴增區(qū))

4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul;

熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)

NONE,請勿選擇 ROX 參比熒光。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時間 收集熒光信號

1 1 cycle 95℃ 10min 否

2 40 cycle

94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5. 結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,當曲線出

現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍

內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上

下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。

【儲存條件和有效期】

試劑盒保存于-20±5℃,有效期 12 個月;

避免反復(fù)凍融,凍融次數(shù)不超過 5 次;試劑開瓶后,在室溫條件下放置時間不

應(yīng)超過 8 小時;運輸采用干冰(或者冰袋)保持低溫,運輸時間不應(yīng)超過 4 天。試

劑盒生產(chǎn)日期見產(chǎn)品標簽。

7. 質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品:無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示;

陽性質(zhì)控品:擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32;

以上條件應(yīng)同時滿足,否則實驗視為無效。

8. 產(chǎn)品性能指標

陰陽性參考品符合率:8 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合

率為 100%。

低檢測限:2.0×102copies/ml。

精密度:批內(nèi)、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)(CV)均≤3%。

公司優(yōu)勢:
1)質(zhì)量:我司提供的的試劑為世界
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