禽傳染性法氏囊病毒(IBDV)熒光PCR試劑盒說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:禽傳染性法氏囊病毒(IBDV)核酸擴(kuò)增檢測試劑盒(PCR 熒光探針法)
Name :Nucleic acid amplification kit for detection of avian infectious bursal disease virus (IBDV) (PCR fluorescent probe method)
【包裝規(guī)格】48T/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于檢測全血等樣本中的禽傳染性法氏囊病毒,用于禽傳染性法氏囊病毒感染的輔助診斷,其檢測結(jié)果僅供參考。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒用一對禽傳染性法氏囊病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光 PCR 技術(shù)對禽傳染性法氏囊病毒的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。
【適用儀器】
ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ
Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。
【標(biāo)本要求】
標(biāo)本采集:用注射器取血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管
保存運(yùn)輸:上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過
6 個月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1樣本前處理
取抗凝血下層血細(xì)胞 50uL,加入 100uL 雙蒸水吹勻
1.2DNA 提取
1) 對上述處理好的標(biāo)本加入等體積核酸提取液(固體標(biāo)本加入50uL核酸提取液),
100℃恒溫處理 10 分鐘,13,000 rpm 離心 5 分鐘,取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5ml
EP 管,-20℃保存;
2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 DNA 提取試劑
盒(離心柱提取法),請嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。
2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性
對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 YP 反應(yīng)液 酶液
用量(樣本數(shù)為 N) 20μl 1μl
3. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl,分別加入相應(yīng)的反
應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul;
熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)
NONE,請勿選擇 ROX 參比熒光。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時間 收集熒光信號
1 1 cycle 95℃ 10min 否
2 40 cycle
94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
5. 結(jié)果分析判定
5.1結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出
現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍
內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上
下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。
5.2結(jié)果判斷
陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線;
可疑:檢測通道 35.0<Ct 值≤37,建議重復(fù)檢測,如果檢測通道仍為 35.0<Ct
值≤37,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;
陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。
【儲存條件和有效期】
試劑盒保存于-20±5℃,有效期 12 個月;
避免反復(fù)凍融,凍融次數(shù)不超過 5 次;試劑開瓶后,在室溫條件下放置時間不
應(yīng)超過 8 小時;運(yùn)輸采用干冰(或者冰袋)保持低溫,運(yùn)輸時間不應(yīng)超過 4 天。試
劑盒生產(chǎn)日期見產(chǎn)品標(biāo)簽。
7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品:無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示;
陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32;
以上條件應(yīng)同時滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無效。
8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)
陰陽性參考品符合率:8 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合
率為 100%。
低檢測限:2.0×102copies/ml。
精密度:批內(nèi)、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)(CV)均≤3%。
公司優(yōu)勢:
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