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產(chǎn)品名稱:

登革熱病毒1型DFV-I熒光PCR核酸檢測試劑盒

產(chǎn)品型號: 產(chǎn)品時間: 2023-03-08
登革熱病毒1型DFV-I熒光PCR核酸檢測試劑盒適用于檢測的疑似感染病人的靜脈血等標本中登革熱病毒 1 型 RNA,適用于登革熱病毒 1 型感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。
本試劑盒用一對登革熱病毒 1 型特異性引物,結(jié)合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術對登革熱病毒 1 型 RNA 進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

產(chǎn)品概述

登革熱病毒1型DFV-I熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

商品名稱:登革熱病毒 1 型(DFV-I)核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)

Name :Diagnostic Kit for Dengue Virus type 1 RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

【包裝規(guī)格】48 份/盒

【預期用途】

本試劑盒適用于檢測的疑似感染病人的靜脈血等標本中登革熱病毒 1 型 RNA,

適用于登革熱病毒 1 型感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。

【檢驗原理】

本試劑盒用一對登革熱病毒 1 型特異性引物,結(jié)合一條特異性熒光探針,用一

步法熒光 RT-PCR 技術對登革熱病毒 1 型 RNA 進行體外擴增檢測,用于臨床上對

可疑感染者的病原學診斷。

【試劑組成】

名 稱 規(guī) 格

酶液 50μl×1 管

DFV-I 反應液 1.0ml×1 管

DFV-I 陽性質(zhì)控品 50μl ×1 管

陰性質(zhì)控品 250μl ×1 管

說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融少于 5 次,

有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ

Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】

疑似感染病人的靜脈血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管。

【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標

本運送應采用 2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1樣本前處理

2000rpm 離心 5min,吸取上層血清轉(zhuǎn)入 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒(離心柱提取

法),請按照試劑盒說明書進行操作。

2. 試劑配制(試劑準備區(qū))

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

試劑 DFV-I 反應液 酶液

用量 20μl 1μl

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl,分別加入相應的反

應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR 擴增(核酸擴增區(qū))

4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內(nèi);

4.2設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25ul;熒光通道選擇:

檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請勿

選擇 ROX 參比熒光。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設置:

步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時間 收集熒光信號

1 1cycle 42℃ 20min 否

2 1 cycle 95℃ 10min 否

3 40 cycle

94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5. 結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,當曲

線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15

范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value

值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線;

可疑:檢測通道 35.0<Ct 值≤37,建議重復檢測,如果檢測通道仍為 35.0<Ct

值≤37,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;

陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。

6. 檢測方法的局限性

Ø 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關;

Ø 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

Ø 陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,會導致假陽性結(jié)果;

Ø 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結(jié)果;

Ø 不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結(jié)果;

Ø 試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或

定量檢測不準確的結(jié)果;

Ø 本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

7. 質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品:無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示;

陽性質(zhì)控品:擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32;

以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。

8. 產(chǎn)品性能指標

陰陽性參考品符合率:5 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合率

為 100%。

低檢測限:5.0×102copies/ml。

精密度:批內(nèi)、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)(CV)均小于等于 3%。

【注意事項】

Ø 所有操作嚴格按照說明書進行;

Ø 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應自然融化,*混勻并短暫離心;

Ø 反應液應避光保存;

Ø 反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

Ø 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)工作服;

Ø 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,以免交叉污染;

Ø 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

Ø 試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全

通則》進行處理。

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