漢坦病毒通用型(HTV-U)熒光PCR檢測試劑盒說明書
【產(chǎn)品名稱】
商品名稱:漢坦病毒通用型(HTV-U)核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)
Name :Diagnostic Kit for Hantavirus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)
【包裝規(guī)格】48 份/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于檢測的鼠或疑似感染病人的血液等標(biāo)本中漢坦病毒通用型RNA,適用于漢坦病毒通用型感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用一對漢坦病毒通用型特異性引物,結(jié)合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對漢坦病毒通用型 RNA 進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。
【試劑組成】
說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【適用儀器】
ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ
Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。
【標(biāo)本采集】
抽取鼠或疑似感染病人的血液 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管。
【保存和運輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標(biāo)
本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復(fù)凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1樣本前處理
按 RNA 提取試劑盒說明書進行提取。
1.2RNA 提取
推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒(離心柱提取
法),請按照試劑盒說明書進行操作。
2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性
對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 HTV-U 反應(yīng)液 酶液
用量 20μl 1μl
1121-48廣州管圓線蟲(AC)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
0321-48腸道病毒EV71型(EV-71)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
0421-48 saffold心病毒(SAFV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
0621-48柯薩奇病毒CA16型(CAV-16)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
0721-48呼吸道合胞病毒A 型(RSV-A)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
0821-48呼吸道合胞病毒B 型(RSV-B)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1021-48登革熱病毒2型(DFV-II)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1121-48登革熱病毒3型(DFV-III)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1521-48新疆出血熱病毒(XHFV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1621-48寨卡(zika)病毒核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1721-48黃熱病毒(YFV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1821-48布尼亞病毒(BV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1921-48登革熱病毒4型(DFV-IV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
2021-48登革熱病毒1型(DFV-I)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1711-48貂源性成分(Martes)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1811-48狐貍源性成分(Vulpes)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1911-48鯊魚源性成分(Shark)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
3. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl,分別加入相應(yīng)的反
應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4. PCR 擴增(核酸擴增區(qū))
4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);
4.2設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul;熒光通道選擇:
檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請勿
選擇 ROX 參比熒光。
4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲
線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15
范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value
值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。
5.2結(jié)果判斷
陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線;
可疑:檢測通道 35.0<Ct 值≤37,建議重復(fù)檢測,如果檢測通道仍為 35.0<Ct
值≤37,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;
陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。
7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品:無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示;
陽性質(zhì)控品:擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32;
以上條件應(yīng)同時滿足,否則實驗視為無效。
8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)
漢坦病毒通用型(HTV-U)熒光PCR檢測試劑盒關(guān)聯(lián)產(chǎn)品:
4121-48肉毒桿菌E型(CB-E)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
4221-48肉毒桿菌F型(CB-F)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
4321-48表皮葡萄球菌(SE)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
4421-48糞腸球菌(EF)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
4521-48惡性瘧原蟲(PF)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
0321-48人類白細胞抗原(HLA-B27)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
0521-48解脲支原體(UU)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
0821-48人皰疹病毒(HHV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
0921-48單純皰疹病毒(HSV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1021-48異尖線蟲(Ani)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |