呼吸道合胞病毒B型(RSV-B)熒光PCR試劑盒說明書
【產(chǎn)品名稱】
商品名稱:呼吸道合胞病毒 B 型(RSV-B)核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)
Name :Diagnostic Kit for Respiratory Syncytial Virus type B RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)
【包裝規(guī)格】48 份/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于檢測的咽拭子標(biāo)本等標(biāo)本中呼吸道合胞病毒 B 型 RNA,適用
于呼吸道合胞病毒 B 型感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用一對呼吸道合胞病毒 B 型特異性引物,結(jié)合一條特異性熒光探針,
用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對呼吸道合胞病毒 B 型 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測,用于
臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。
【標(biāo)本采集】
采集病人的咽拭子標(biāo)本,應(yīng)使用采樣拭子,適度拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部
位,應(yīng)避免觸及舌部;迅速將拭子放入標(biāo)本采集管中,旋緊管蓋并密封,以防干燥。
【保存和運(yùn)輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標(biāo)
本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1樣本前處理
取 100uL 拭子標(biāo)本于 1.5mL 滅菌離心管中。
1.2RNA 提取
推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒(離心柱提取
法),請按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。
2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性
對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 RSV-B 反應(yīng)液 酶液
用量 20μl 1μl
3. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl,分別加入相應(yīng)的反
應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);
4.2設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul;熒光通道選擇:
檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請勿
選擇 ROX 參比熒光。
4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時間 收集熒光信號
1 1cycle 42℃ 20min 否
2 1 cycle 95℃ 10min 否
3 40 cycle
94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
5. 結(jié)果分析判定
5.1結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲
線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15
范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value
值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。
5.2結(jié)果判斷
陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線;
可疑:檢測通道 35.0<Ct 值≤37,建議重復(fù)檢測,如果檢測通道仍為 35.0<Ct
值≤37,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;
陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。
呼吸道合胞病毒B型(RSV-B)熒光PCR試劑盒相關(guān)產(chǎn)品:
1111-48鼻疽伯克霍爾德菌(BM)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1411-48伊氏錐蟲(TE)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1511-48兔黏液瘤病毒(RMV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1611-48野兔熱(Tul)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1711-48馬皰疹病毒4型(EHV-IV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
1811-48羊衣原體 |
1911-48牛支原體(MYPB)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
2011-48牛細(xì)小病毒(BPV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
2111-48牛腺病毒3型(BAV-3)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法) |