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產(chǎn)品名稱:

人(VEGF-B)ELISA試劑盒

產(chǎn)品型號: 產(chǎn)品時間: 2023-03-08
本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷
人(VEGF-B)ELISA試劑盒
檢測原理
人血管內(nèi)皮細胞生長因子B(VEGF-B)ELISA試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。

產(chǎn)品概述

本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷

人血管內(nèi)皮細胞生長因子B(VEGF-B)

ELISA試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被人(VEGF-B)ELISA試劑盒的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人(VEGF-B)ELISA試劑盒呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

  1. 酶標儀(450nm)
  2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
  3. 37℃恒溫箱

操作注意事項

  1.   試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
  2.   實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
  3.   濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。
  4.   嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
  5.   所有液體組分使用前充分搖勻。

操作步驟

  1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2.   設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
  3.   樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
  4.   除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.   每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

試劑盒組成

名稱

 

 

備注

微孔酶標板

 

 

標準品

 

 

樣本稀釋液

 

 

檢測抗體-HRP

 

 

20×洗滌緩沖液

 

 

按說明書進行稀釋

底物A

 

 

底物B

 

 

終止液

 

 

封板膜

 

 

說明書

 

 

自封袋

 

 

注:標準

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

  1.   手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
  2.   自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

 

    結(jié)果判斷

     繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應(yīng)OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

     

     

    免責聲明

    1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。

    2.   嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。

    試劑盒性能

    1.  準確性:標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。

    2.  靈敏度:見說明書。

    3.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

    4.  重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

    5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

    6.  有效期:6個月

     

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