通用型全基因組擴(kuò)增試劑盒(WGA)是用于基因組DNA擴(kuò)增全基因組的試劑盒,可以方便、簡(jiǎn)單、快速、 經(jīng)濟(jì)的得到穩(wěn)定產(chǎn)量的基因組DNA擴(kuò)增樣品。本產(chǎn)品有如下優(yōu)點(diǎn):
1. 基于phi29 DNA聚合酶的高保真性、高合成率和*鏈取代能力。
2. 可以擴(kuò)增基因組達(dá)上萬(wàn)倍,具有高產(chǎn)量和高保真性的特點(diǎn)。
3. 可使用各種來(lái)源的樣品,包括全血,干血,發(fā)根,口腔粘膜刮液培養(yǎng)細(xì)胞, 真菌和病毒等。
4. 操作簡(jiǎn)便快捷,恒溫(30℃)反應(yīng),無(wú)須PCR儀即可實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增。
5. 產(chǎn)物可用于多種后續(xù)試驗(yàn),包括多重PCR、長(zhǎng)片斷PCR、定量PCR、克隆、 文庫(kù)構(gòu)建、單倍型分析、測(cè)序、基因芯片分析、各種遺傳分析(片段差異, 微衛(wèi)星差異,SNP,STR)等。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
本產(chǎn)品適用于純化好的基因組DNA。
一、模板變性
1. 在PCR塑料管中加入9μL WGA溶液A,加入1μL純化好的基因組DNA模板 (DNA含量在10ng-100ng之間)。
2. 在PCR儀器上95℃3分鐘變性模板DNA。注意:必須打開(kāi)熱蓋。
3. 冰上放置待用。
4. 加入10 μL 2×WGA溶液B,輕柔吹打混勻。
5. 加入1 μL phi 29 DNA聚合酶(10U/μL),輕柔吹打混合均勻。
6. 30℃保溫10-12小時(shí)。使用PCR儀進(jìn)行30℃保溫并打開(kāi)熱蓋保溫。如果 采用30℃水浴,在樣品管中加入30-50μL石蠟油以防水分蒸發(fā),因?yàn)?0℃ 長(zhǎng)時(shí)間的水浴也能使水分蒸發(fā)到管壁,從而改變反應(yīng)體系中各成分的濃度、降 低WGA反應(yīng)效率。如果模板DNA量比較高,WGA三小時(shí)即可檢測(cè)到DNA擴(kuò)增。
7. 65℃保溫20分鐘使phi29 DNA聚合酶*滅活,然后-20℃長(zhǎng)期放置或立即 使用。注:由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性,所以強(qiáng)烈推薦反應(yīng)結(jié)束 后65℃保溫20分鐘以將酶*滅活以免其干擾后續(xù)反應(yīng)或長(zhǎng)期保存時(shí)其降解 DNA。
通用型全基因組擴(kuò)增試劑盒(WGA)低溫運(yùn)輸、-20℃保存, 有效期一年。