PRRSV-C/PRRSV-M/PRRSV-NADC30熒光PCR說明書
【產(chǎn)品名稱】
商品名稱:豬藍耳病毒經(jīng)典型/高致病性豬藍耳病毒/豬藍耳病毒NADC30株(PRRSV-C/PRRSV-M/PRRSV-NADC30)??核酸檢測試劑盒(實時熒光-PCR 法)
英 文 名 :Classical swine / Blue virus / porcine blue ear virus / porcine blue ear virus NADC30 strain (PRRSV-C/PRRSV-M/PRRSV-NADC30) nucleic acid detection kit (real-time fluorescence -PCR)?
【包裝規(guī)格】48T/盒
【預期用途】
豬藍耳病毒經(jīng)典型/高致病性豬藍耳病毒/豬藍耳病毒NADC30株(PRRSV-C/PRRSV-M/PRRSV-NADC30),是由A型流感病毒引起禽類的一種從呼吸系統(tǒng)到嚴重全身敗血癥等多種癥狀的傳染病[1]。其中PRRSV-C/PRRSV-M/PRRSV-NADC30,不僅可以感染禽類,也可以感染人類,特別是1999年以來,嚴重威脅了人類健康、畜牧業(yè)生產(chǎn)和畜產(chǎn)品的貿(mào)易,其公共衛(wèi)生意義已引起*的廣泛關注[4]。本試劑盒利用實時熒光PCR原理,定性、定量檢測PRRSV-C/PRRSV-M/PRRSV-NADC30,對PRRSV-C/PRRSV-M/PRRSV-NADC30引起的流感診斷有重要指導意義。
【檢驗原理】
本試劑盒針對PRRSV-C/PRRSV-M/PRRSV-NADC30?? 基因高度保守區(qū)域設計特異性引物和探針, 在反應體系中含基因組模板的情況下,PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應通道的信號強度進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測 結(jié)果的定性、定量分析。
【試劑組成】
名 稱 規(guī) 格
酶液 50μL×1 管
AIV-H9 反應液 1.0mL×1 管
AIV-H9 陽性質(zhì)控品 50μL ×1 管
陰性質(zhì)控品 250μL ×1 管
注:
1)不同批號試劑不能混用。
2)試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標示的檢測次數(shù)。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融次數(shù)不超過 5 次,有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
【標本采集】
病死或撲殺禽,取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織;待檢活禽,用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄物,置于 1mL 50%甘油生理鹽水中。
【保存和運輸】
上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。
1.2RNA 提取
推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的RNA 提取試劑盒(離心柱提取法),請按照試劑盒說明書進行操作。
2.試劑配制(試劑準備區(qū))
根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:
6.質(zhì)控標準
陰性質(zhì)控品:無明顯擴增曲線丏無 Ct 值顯示;
陽性質(zhì)控品:擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,丏 Ct 值≤32; 以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。
【參考文獻】
[J] .Virology, 2000, 267( 2):279 -288.
[3]唐秀英, 付朝陽, 馮菊艷. H9 亞型禽流感的流行不防制[J] . 預防獸醫(yī)學進展, 2000, 2( 4): 1-3.
[4]郭元吉, 李建國, 程小雯, 等. 禽 H9N2 亞型流感病毒能感染人的發(fā)現(xiàn)[J] . 中華實驗和臨床病毒學雜志, 1999, 13( 2): 105-108.
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