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產(chǎn)品名稱:

鴨源性成分Co1基因(Duck-Co1)熒光PCR試劑盒

產(chǎn)品型號: 產(chǎn)品時間: 2023-07-05
鴨源性成分Co1基因(Duck-Co1)熒光PCR試劑盒針對鴨源性成分Co1基因高度保守區(qū)基因序列設(shè)計特異性引物和熒光探針。在反應體系中含鴨源性成分Co1基因組模板的情況下,PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道的信號強度進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性、定量分析。

產(chǎn)品概述

鴨源性成分Co1基因(Duck-Co1)熒光PCR試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:鴨源性成分Co1基因(Duck-Co1)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR 法)

Name   :Duck-Co1 Gene (Duck-Co1) Nucleic Acid Detection Kit (Fluorescence-PCR)

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預期用途】

動物源性成分廣泛分布于食品、飼料、化妝品等,與人們的生活息息相關(guān),其中食品和飼料所占的比例大。肉及肉制品摻假成為世界各國共同關(guān)注的熱點問題,肉食品及其飼料的安全隱患直接關(guān)系到人類的安危。近幾十年來,以PCR技術(shù)為核心的動物源性成分檢測獲得了廣泛應用。

本試劑盒適用于動物組織以及食品、飼料等樣本中鴨源性成分Co1基因的檢測。

【檢驗原理】

本試劑盒對鴨源性成分Co1基因保守區(qū)設(shè)計特異性的引物和探針[1-3],用熒光 PCR 技術(shù)對核酸進行體外擴增檢測,從而達到快速檢測之目的。

【試劑組成】

名 稱 規(guī) 格

酶液 50μL×1 管

Chicken 反應液 1.0mL×1 管

Chicken 陽性質(zhì)控品 50μL ×1 管

陰性質(zhì)控品 250μL ×1 管

注:

1)不同批號試劑不能混用。

2)試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標示的檢測次數(shù)。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融次數(shù)不超過 5 次。有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】

取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g。

【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃。但不能超過6個月,標本運送應采用0℃。

【使用方法】

1.樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1樣本前處理:

取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g,手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中, 8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2DNA 提取

DNA 的提取推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑盒(離心柱提取法),請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

2.試劑配制(試劑準備區(qū))

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時間 收集熒光信號

1 1 cycle 95℃ 10min 否

2 40 cycles 94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,當曲線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。

5.2判斷

a)檢測通道 Ct 值<30.0,有 FAM 熒光信號檢出,并出現(xiàn)明顯的擴增曲線,判斷樣品為陽性。

b)當 30.0≤Ct 值≤35.0 時,且有明顯的擴增曲線時,則需重復實驗。再次擴增后檢測體系的Ct 值仍≤35.0,且有明顯的擴增曲線,則判定該樣品含有相應的動物源性成分。當再次擴增后,檢測體系 Ct 值>35.0,或無明顯的擴增曲線,則判定該樣品不含相應的動物源性成分。

6.檢測方法的局限性

1)樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān);

2)樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

3)陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,會導致假陽性結(jié)果;

4)病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結(jié)果;

5)不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結(jié)果;

6)試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或   定量檢測不準確的結(jié)果;

7)本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

7.質(zhì)控標準

a)空白對照:無FAM 熒光信號檢出或 Ct 值≥35.0,未出現(xiàn)典型的擴增曲線。

b)陰性對照:無FAM 熒光信號檢出或 Ct 值≥35.0,未出現(xiàn)典型的擴增曲線。

c)陽性對照:有 FAM 熒光信號檢出,并出現(xiàn)典型的擴增曲線,Ct 值<30.0。

d)以上應同時滿足,否則本次實驗無效。

【注意事項】

1)所有操作嚴格按照說明書進行;檢驗過程中,參照《GB/T 27403 實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品分子生物學檢測》的規(guī)定進行。

2)試劑盒內(nèi)各種組分使用前應自然融化,混勻并短暫離心;

3)反應液應避光保存;

4)反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

5)使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)工作服;

6)樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,以免交叉污染;

7)實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

8)試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全   通則》進行處理。

【參考文獻】

[1]商務部. SB/T 10923-2012 肉及肉制品中動物源性成分的測定實時熒光 PCR 法[S]. 北京:中國標準出版社, 2012.

[2]王琰. 兔源性食品的PCR-mtDNA 鑒別[J]. 山東師范大學, 2013.

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