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產(chǎn)品名稱(chēng):

艱難梭菌(CD)熒光PCR核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品型號(hào): 產(chǎn)品時(shí)間: 2023-03-08
艱難梭菌(CD)熒光PCR核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒采用 TaqMan 探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),設(shè)計(jì)一對(duì)艱難梭菌特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR 技術(shù)對(duì)艱難梭菌的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè), 用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。在反應(yīng)體系中含基因組模板的情況下,反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放 熒光信號(hào)。利用熒光定量PCR儀對(duì)PCR過(guò)程中相應(yīng)通道的信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出,實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性、定量分析。

產(chǎn)品概述

艱難梭菌(CD)熒光PCR核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名稱(chēng):艱難梭菌 (CD)核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒(PCR 熒光探針?lè)?

Name :Diagnostic Kit for Clostridium difficile DNA(PCR Fluorescence Probing)

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測(cè)水樣糞便等樣本中的艱難梭菌,用于艱難梭菌感染的輔助診斷,其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用 TaqMan 探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù),設(shè)計(jì)一對(duì)艱難梭菌特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR 技術(shù)對(duì)艱難梭菌的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè), 用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

說(shuō)明:不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 7 次,有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】

取水樣便 0.5~1mL

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃,但不能超過(guò) 6 個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1 樣本前處理

13000rpm 離心 2min,去盡上清

1.2 DNA 提取

1) 對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入等體積核酸提取液(固體標(biāo)本加入50μL核酸提取液), 100℃恒溫處理 10min,13,000 rpm 離心 5min,取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(離心柱提取法),請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR 反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照;樣品每滿(mǎn) 7 份,多配制 1 份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;

熒光通道選擇: 檢測(cè)通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光。

5. 結(jié)果分析判定

5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體

傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop

值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照),重新分析結(jié)果。

5.2 結(jié)果判斷

陽(yáng)性:檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線。

可疑:檢測(cè)通道 Ct 值>35.0,且出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn),重復(fù)試驗(yàn)

結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴(kuò)增曲線者為陽(yáng)性,否則為陰性。

陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú) Ct 值且無(wú)明顯的擴(kuò)增曲線。

6. 檢測(cè)方法的局限性

1)樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);

2)樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果;

3)陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果;

4)病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

5)不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

6)試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果;

7)本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品:無(wú)明顯擴(kuò)增曲線或無(wú) Ct 值顯示;

陽(yáng)性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期,且 Ct 值≤32; 以

上條件應(yīng)同時(shí)滿(mǎn)足,否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

陰陽(yáng)性參考品符合率:5 份陽(yáng)性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合率為

100%。

低檢測(cè)限:1.0×10 3copies/mL。

精密度:批內(nèi)、批間精密度檢測(cè) Ct 值的變異系數(shù)(CV)均小于等于 3%。

【注意事項(xiàng)】

1)所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行;

2)試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,*混勻并短暫離心;

3)反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

4)反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

5)使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)工作服;

6)樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

7)實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;

8)試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全 通則》進(jìn)行處理。

艱難梭菌(CD)熒光PCR核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒相關(guān)產(chǎn)品:

1002玉米內(nèi)源基因IVR核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法) 48T
0342轉(zhuǎn)基因植物PRSV Rep品系核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法) 48T
0332轉(zhuǎn)基因植物Cry3A基因核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法) 48T
0322轉(zhuǎn)基因植物Cry1A(c)基因核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法) 48T
0312轉(zhuǎn)基因植物Bar基因核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法) 48T

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