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產(chǎn)品名稱(chēng):

沙門(mén)氏菌SPP-spec熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品型號(hào): 產(chǎn)品時(shí)間: 2023-07-05
沙門(mén)氏菌SPP-spec熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒采用TaqMan探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),設(shè)計(jì)一對(duì)沙門(mén)氏菌特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR技術(shù)對(duì)沙門(mén)氏菌的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。在反應(yīng)體系中含基因組模板的情況下,PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放 熒光信號(hào)。利用熒光定量PCR儀對(duì)PCR過(guò)程中相應(yīng)通道的信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出,實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性、定量分析。

產(chǎn)品概述

沙門(mén)氏菌SPP-spec熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名稱(chēng):沙門(mén)氏菌(SPP)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)  

Name  :Salmonellaspp. Detection Kit (Real-Time PCRMethod)

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預(yù)期用途】

沙門(mén)氏菌(Salmonella spp.) 是腸桿菌科中一大類(lèi)重要的致病菌,感染畜禽后可引起一系列的疾病,成為畜禽肉胴體、畜禽產(chǎn)品污染的重要來(lái)源,并可以通過(guò)各種途徑傳染給人,引起人的食源性疾病[1]。為有效地預(yù)防和控制疾病發(fā)生,建立快速、敏感而又特異的檢測(cè)方法,PCR技術(shù)已成為檢測(cè)食品、臨床樣品和環(huán)境樣品中沙門(mén)氏菌的重要手段[2,3]。

本試劑盒適用于檢測(cè)水樣糞便,疑似污染的水、食物等樣本中的沙門(mén)氏菌,用于沙門(mén)氏菌感染的輔助診斷。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用TaqMan探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),設(shè)計(jì)一對(duì)沙門(mén)氏菌特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR技術(shù)對(duì)沙門(mén)氏菌的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

注:

0111犬細(xì)小病毒(CPV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?48T
0711犬布氏桿菌(BS)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?48T
0316綿羊CYTB基因核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法) 48T
0314山羊CYTB基因核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法) 48T
0216牛MGH基因核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法) 48T

1)不同批號(hào)試劑不能混用。

2)試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標(biāo)示的檢測(cè)次數(shù)。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過(guò)5次,有效期12個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】

水樣便取0.5~1mL;疑似污染的食物取1g

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃,但不能超過(guò)6個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1.樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1樣本前處理

水樣便13000rpm離心2min,去盡上清;疑似污染的食物用手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中,8000rpm離心2min,取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中;疑似污染的水直接取100μL

1.2DNA提取

1)對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入50μL核酸提取液,100℃恒溫處理10min,13,000 rpm離心5min,取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;

2)DNA的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(離心柱提取法),請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2.試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照;樣品每滿(mǎn)7份,多配制1份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:

 

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到PCR反應(yīng)管中,21uL/管。

3.加樣(樣本處理區(qū))

將步驟1提取的DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4.PCR擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為25μL;

熒光通道選擇: 檢測(cè)通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI系列儀器請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光,選擇None即可。

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置Baseline和Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline的start值(一般可在3~15范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop值(一般可在5~20范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及Threshold的Value值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照),重新分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽(yáng)性:檢測(cè)通道Ct值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線。

可疑:檢測(cè)通道Ct值>35.0,且出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn),重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)Ct值≤35.0和典型擴(kuò)增曲線者為陽(yáng)性,否則為陰性。

陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú)Ct值且無(wú)明顯的擴(kuò)增曲線。

7.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品:無(wú)明顯擴(kuò)增曲線或無(wú)Ct值顯示;

陽(yáng)性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期,且Ct值≤32;

以上條件應(yīng)同時(shí)滿(mǎn)足,否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

【參考文獻(xiàn)】

[1] 曾曉芳. 畜產(chǎn)品中沙門(mén)氏菌污染的檢測(cè)與控制[J]. 四川畜牧獸醫(yī), 2003, 30(4):28-29.

[2] Marijia T, Gorazd A, An improved 16S rRNA based PCR method for the specific detection of Salmonella enteria [J]. International Journal of Food Microbiology, 2003, 80: 67-75.

[3] Judy S W, Karen L J, Suresh D P, et al. Specific detection of Salmonella spp. By multiplex polymerase chain reaction [J]. Applied and Environmental Microbiology, 1993, 59(5): 1473-1479.

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