基孔肯雅病毒(CHIKV)熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書
【產(chǎn)品名稱】
商品名稱:基孔肯雅病毒(CHIKV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)
Name :Diagnostic Kit for Chikungunya Virus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)
【包裝規(guī)格】48份/盒
【預期用途】
本試劑盒適用于檢測的疑似感染病人的靜脈血等標本中基孔肯雅病毒 RNA,適用于基孔肯雅病毒感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用一對基孔肯雅病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對基孔肯雅病毒 RNA 進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
【試劑組成】
說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融少于 5 次,
有效期 12 個月。
【標本采集】
疑似感染病人的靜脈血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管。
【保存和運輸】
推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒(離心柱提取
法),請按照試劑盒說明書進行操作。
2. 試劑配制(試劑準備區(qū))
根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性
對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:
試劑 CHIKV 反應液 酶液
用量 20μl 1μl
3. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl,分別加入相應的反
應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4. PCR 擴增(核酸擴增區(qū))
4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內(nèi);
4.2設(shè)置好通道、樣品信息,反應體系設(shè)置為 25ul;熒光通道選擇:
檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請勿
選擇 ROX 參比熒光。
4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,當曲
線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15
范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value
值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。
5.2結(jié)果判斷
陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線;
可疑:檢測通道 35.0<Ct 值≤37,建議重復檢測,如果檢測通道仍為 35.0<Ct
值≤37,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;
陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。
7. 質(zhì)控標準
陰性質(zhì)控品:無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示;
陽性質(zhì)控品:擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32;
以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。
8. 產(chǎn)品性能指標
陰陽性參考品符合率:5 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合率
為 100%。
低檢測限:5.0×102copies/ml。
精密度:批內(nèi)、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)(CV)均小于等于 3%。
基孔肯雅病毒(CHIKV)熒光PCR核酸檢測試劑盒相關(guān)產(chǎn)品:
0211轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T | ||||||||
0131轉(zhuǎn)基因植物FmV35S啟動子核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T | ||||||||
0121轉(zhuǎn)基因植物NOS終止子核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T | ||||||||
0111轉(zhuǎn)基因植物CamV35S啟動子核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
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