產(chǎn)品介紹

登革熱IgM（捕獲法）ELISA檢測試劑盒Panbio

應(yīng)用范圍

DENV Detect IgM Capture ELISA是一種用來檢測人是否感染登革熱病毒的ELISA檢測系統(tǒng)，它可以檢測出人血清中是否存在抗登革熱病毒源性重組抗原（DENVRA）的IgM抗 體。此診斷實驗用于有登革熱發(fā)熱或是登革熱血熱臨床癥狀的病人檢測。陽性結(jié)果必須經(jīng)過蝕斑減少中和試驗（PRNT）或是根據(jù)CDC疾病診斷指南確證。

用于臍帶血檢測，新生兒測試，產(chǎn)前篩查，或是普通人群篩查的實驗特征性能還未建立。此試驗未經(jīng)FDA明確證明可用于血液或血漿捐獻者的檢測。

注意：試驗中需觀察西尼羅河或是其他病毒中的IgM是否會與登革熱試劑盒發(fā)生交叉反應(yīng)，如可能發(fā)生了交叉反應(yīng)，則視為警告狀態(tài)

實驗原理

DENV Detect IgM ELISA試劑盒是由一種酶聯(lián)擴大的兩步法免疫檢測系統(tǒng)。在此實驗中，將登革熱陰性質(zhì)控、陽性質(zhì)控和未知濃度的血清樣品用樣品稀釋液稀釋，然后加入到包被 了抗人IgM抗體的微孔中溫育，之后分別加入登革熱源性重組抗原DENVRA和正常細胞抗原（NCA）進行溫育。溫育并洗板后，用HRP標(biāo)記的DEN特異 性抗體處理。第二次溫育并洗板后，加入TMB底物液進行溫育。之后再加入酸性終止液，450nm處測OD值可確定底物反應(yīng)的程度。當(dāng)高于一定數(shù)值時（臨界 值），樣品的吸光度值可確定樣品中是否存在登革熱抗體。

注意：陰性質(zhì)控和弱陽性質(zhì)控以內(nèi)在質(zhì)控形式提供，其目的是為了監(jiān)測試劑盒成分的完整性。

試劑盒成分

登革熱IgM ELISA試劑盒提供了足夠做96個測試所需要的試劑。試劑盒成分如下：

登革熱檢測特定材料：

1）抗人IgM包被的包被板：帶板蓋的板架，包被有抗人IgM， 96孔，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

2）樣品稀釋液：1瓶，25ml，即用，含吐溫20的Tris-HCl緩沖液，0.05%的Proclin防腐劑和添加劑，用于試驗樣品，陽性和陰性質(zhì)控的稀釋，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定

3）即用型的登革熱重組性抗原（DENRA）：1瓶，3ml，含吐溫20的Tris-HCl緩沖液，＜0.05%的Proclin防腐劑，抗生素（0.0025-0.004% G418 硫酸鹽），登革熱重組抗原和添加劑， 2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

4）即用型正常細胞抗原（NCA）：1支，3ml，含吐溫20的Tris-HCl緩沖液，＜0.05%的Proclin防腐劑，COS-1細胞的上清， 2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

5）登革熱陰性質(zhì)控：1支，50ul陰性血清，登革熱陰性質(zhì)控可輔助監(jiān)測試劑盒的完整性。2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

6）登革熱IgM陽性質(zhì)控：1支，50ul含0.03%的proclin的陽性血清，登革熱陽性質(zhì)控可輔助監(jiān)測試劑盒的完整性。2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

7）10倍濃縮洗滌液：1瓶，120ml，含吐溫20的10倍濃縮的磷酸緩沖鹽，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

8）HRP標(biāo)記的即用型酶聯(lián)物，1瓶，6ml，HRP標(biāo)記的黃熱病毒活性單克隆抗體，含吐溫20的Tris-HCl緩沖液，＜0.01%的硫柳汞防腐劑和添加劑，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

9）Enwash：1瓶，20ml，即用，含吐溫20的磷酸緩沖鹽， 2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定

10）            TMB底物液：1瓶，9ml液態(tài)底物液，即用，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。注意：底物液必須始終儲存于避光試劑瓶中。

11）            終止液：1瓶，內(nèi)含6ml即用型的終止液，1N的硫酸，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。注意：強酸，請戴保護手套、口罩和安全鏡，按照安全條例處理所有的材料。

實驗所需器材但試劑盒不提供

1）可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀

2）生物學(xué)或高純度水

3）真空泵

4）洗板機

5）37℃無CO2的孵箱

6）1-10ul的單道移液器，50-200ul的單道和多道移液器。

7）聚丙烯試管

8）Parafilm封口膜

9）計時器

10）            旋渦混合器

樣品的采集與準(zhǔn)備

1）此實驗必須用血清來做。全血和血漿樣本不能直接檢測。

2）不要將不同批次的試劑混亂

3）不要加熱熱滅活的試驗血清

4）實驗前將所有試劑平衡至室溫，溫度的改變會對試驗有影響

5）避免反復(fù)凍融樣品血清

6）直接用干凈的槍頭從試劑瓶中移去試劑，不能轉(zhuǎn)移，避免污染

7）不用的板條應(yīng)立即放回至密封袋中保存

8）不要使用任何過期的試劑

9）避免試劑暴露受熱或陽光直射

10）            有些試劑可能會產(chǎn)生沉淀，使用前一定要混勻

11）            洗滌過程不完整會對試驗結(jié)果產(chǎn)生影響

12）            為了減少由于孵育時間的差異而引起的漂移，建議底物液和終止液加入的時間和速度要*

13）            避免試劑中有微生物污染，尤其是酶聯(lián)物

14）            每一次吸取試劑，標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品時都應(yīng)用干凈的槍頭

實驗步驟

將所有的試劑成分和樣品都平衡至室溫。實驗前反復(fù)倒置以混合試劑和樣品。

試劑準(zhǔn)備：

1）1X洗滌液的配制：用生物學(xué)或高純度水將10倍濃縮型的洗滌液稀釋成1X的洗滌液。為了制備即用型的洗滌緩沖 液，我們可以將120ml 10倍濃縮的洗滌液加入到1080ml蒸餾水或去離子水中，沖洗掉所有晶體，旋渦混合溶液以至所有晶體都溶解掉。制備好的洗滌液可在室溫下穩(wěn)定儲存6個 月。使用前請檢查洗滌液是否被污染。

2）包被板的準(zhǔn)備：將實驗所需數(shù)目的板條置于板架上。將剩余的板條立即裝入包裝袋中，并儲存于2-8℃的環(huán)境下，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
操作步驟：

1）陽性質(zhì)控、陰性質(zhì)控都必須做雙份檢測,DENRA和NCA都要檢測，未知血清樣品可做一份或雙份，DENRA和NCA都要檢測，按照說明書上的操作流程圖進行操作。

2）將實驗中使用的板條標(biāo)記好。

3）用試劑盒提供的樣品稀釋液將血清和質(zhì)控品稀釋100倍。用小聚丙烯試管進行稀釋，稀釋時至少需要4ul血清、陽性質(zhì)控和陰性質(zhì)控。如：4ul血清加396ul稀釋液。

4）用單道或多道移液器將稀釋好的血清、陰性質(zhì)控和陽性質(zhì)控各50ul加入到相應(yīng)的微孔中。注意，所有的樣品都必須用DENRA和NCA檢測。

5）用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所有板條的底部是沒有覆蓋的。

注意：這樣是為了保證溫度的分布在每個孔的底部和邊緣同等地散播。一旦頂部密封阻礙了蒸發(fā)，任何多余的封板膠必需被剪掉。

6）37℃下孵育1小時。注意：不要將微孔板疊放，必須單獨地分層平輔。這對于溫度的平等分布非常重要。不要使用CO2或任何氣體，不要讓板條接觸任何濕潤的物質(zhì)，如濕紙巾等。

7）溫育后，用洗板機洗板6次，每次每孔300ul。

8）在A-D列中加入50ul DENRA，在E-H列中加入50ul NCA。

9）用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所有板條的底部是沒有覆蓋的。（同步驟5）

10）            37℃下孵育1小時。（同步驟6）

11）            溫育后，用洗板機洗板6次，每次每孔300ul。

12）            用多道移液器在每一微孔中加入50ul HRP標(biāo)記的酶聯(lián)物。

13）            用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所有板條的底部是沒有覆蓋的。（同步驟5）

14）            37℃下孵育1小時。（同步驟6）

15）            溫育后，用洗板機洗板6次，每次每孔300ul。

16）            用多道移液器在每一微孔中加入150ul Enwash溶液。

17）            室溫下溫育（無需蓋板）5min。

18）            溫育后，用洗板機洗板6次，每次每孔300ul。

19）            用多道移液器在每一微孔中加入75ul TMB底物液。

20）            室溫避光溫育10min。

21）            溫育后，用多道移液器在每一微孔中加入50ul終止液，室溫溫育1min。

22）            溫育后，450nm處測    OD值。

登革熱IgM ELISA實驗操作流程圖：

質(zhì)量控制

每一試劑中均含有陰性和陽性質(zhì)控血清，這些質(zhì)控可接受的免疫指數(shù)（ISR）值會在以下的詳細表格中說明，陰性質(zhì)控和陽性質(zhì)控是用于監(jiān)測試劑的實 質(zhì)性錯誤，陽性質(zhì)控并不保證試劑臨界值的精確性。如果任一質(zhì)控的ISR值不符合說明書，則本次實驗是無效的必須重做，如果實驗是無效的，病人的結(jié)果不能公 布。質(zhì)量控制的執(zhí)行必須與地方的，國家的或聯(lián)盟規(guī)則要求和你實驗的質(zhì)量控制程序標(biāo)準(zhǔn)相*，建議使用者參照NCCLS C24A和42CFR493、1256作為質(zhì)量控制實踐的指引。以下的結(jié)果僅作為例子。

陰性質(zhì)控的計算：計算DENRA和NCA的登革熱病毒陰性質(zhì)控值。

例如：登革熱陰性質(zhì)控

                     DENRA          NCA

                       0.108          0.066 

          No 2             0.082          0.061 

          總和             0.190          0.127

平均值（DENRA）= 0.190÷2 = 0.095

       （NCA） = 0.127 ÷ 2 = 0.064 

計算DENRA/NCA的比例： 0.095÷0.064 = 1.48

登革熱陰性質(zhì)控的計算DENRA/NCA比例高于1.65，則實驗必須重做。

陽性質(zhì)控的計算：計算NCA和DENRA的登革熱IgM陽性質(zhì)控。

例如：登革熱陽性質(zhì)控

DENVRA              NCA

                     0.635             0.105

         No 2            0.655             0.115

         總和            1.290             0.220

平均值（DENVRA）= 1.290÷2 = 0.645

       （NCA） = 0.220 ÷ 2 = 0.110 

計算DENVRA/NCA的比例： 0.645÷0.110 = 5.86

登革熱陰性質(zhì)控的計算DENVRA/NCA比例低于5.0，則實驗必須重做。

為了能出具實驗報告，實驗結(jié)果必須滿足下列表格的要求。如果實驗結(jié)果不能*下列要求，則說明試劑退化了或者實驗步驟出現(xiàn)了問題，實驗必須重做。

表1：

結(jié)果計算:

ISR值的計算：如果樣品是做雙份檢測，計算DENRA兩個陰性質(zhì)控的平均OD值，計算NCA兩個陰性質(zhì)控的平均OD值，并計算DENVRA/NCA的比率(ISR)。如果未知樣品只做了一份，直接用DENVRA OD值除以NCA OD值

選擇臨界值和確定可疑范圍：109個真陽性和97個真陰性樣品用于優(yōu)化ISR臨界值，建立可疑范圍?？梢煞秶蓛蓚€臨界值決定，ISR≥2.84的為陽性，相應(yīng)的特異性為99%，靈敏度為91%；ISR≤1.65的為陰性，相應(yīng)的特異性為96%，靈敏度為94%，可疑范圍為1.65-2.84.

結(jié)果說明

表2：:

期望值

疫區(qū)人群

此登革熱IgM檢測試劑盒在2009年被南美的一間診所用于檢測有登革熱癥狀人群的血清樣本.被篩查的66位個體在起初都有發(fā)燒的癥狀.樣本中包含有初次和二次的感染.樣本的反應(yīng)關(guān)系見下面表3和表4.

表3：疫區(qū)人群患者的期望值

a:所有反應(yīng)的樣品都經(jīng)PRNT驗證

非疫區(qū)人群

2004年3月期間,從佛羅里達州, 德克薩斯州, 賓夕法尼亞州收集無登革熱癥狀的200份血清樣本.樣本覆蓋男女的不同年齡階段.被篩選的血清反應(yīng)性見下表4

表4：非疫區(qū)無登革熱癥狀人體的期望值

               a:此樣品經(jīng)PRNT驗證為登革熱陽性

性能特征

世界衛(wèi)生組織調(diào)研表

用于熱帶病和兒童登革熱研究和培訓(xùn)的詳細參考表由兒童緊急基金會/開發(fā)中心/世界銀行/世界衛(wèi)生組織共同提供的.由提供血清樣本的七間實驗室共同出編制.

其中一張用登革熱IgM ELISA檢測試劑盒篩查實驗的結(jié)果表是在波多黎各的病控中心完成,具體見表5

表5：WHO參考樣品的反應(yīng)性

陽性率和陰性率制成表格形式，差的情況就是，可疑樣品對于陽性率來說是假陰性，而可疑樣品對于陰性率來說卻是假陽性。

陽性比率：(100/109) 91.7% (95% CI: 84.9-95.8%)

陰性比率：(90/97) 92.8% (95% CI: 85.6-96.7%)

臨床研究

研究中心1：

此研究采用了一系列具有登革熱癥狀的血清樣本.在規(guī)定的時期內(nèi)收集預(yù)定所需的樣本數(shù).197位個體的血清均取自東南亞的一些實驗室,各取雙份 (1至2周內(nèi)收集,共394份)經(jīng)實驗室證明感染有登革熱的血清樣本.所有的個體在實驗室經(jīng)不同的檢測方法(包括,PCR, IgG滴定等)確定為陽性結(jié)果.

以上所獲的樣本均用PANBIO公司提供的登革熱IgM ELISA試劑盒檢測.以發(fā)燒持續(xù)天數(shù)作為函數(shù)的陰性和陽性結(jié)果具體如下表.

表6：研究中心1的結(jié)果

注意：陽性率和陰性率制成表格形式，差的情況就是，可疑樣品對于陽性率來說是假陰性，而可疑樣品對于陰性率來說卻是假陽性。

研究中心2：

究所采集的具有登革熱癥狀的212個體樣本均來自美國西部.2008-2009年度在規(guī)定的時期收集到預(yù)定所需的樣本.其中大部分的樣品來自加 勒比海和美國德克薩斯州和佛羅里達州.另外小部分的樣品來自非洲和亞洲.檢測的212份樣本中,116份為陰性,67份為陽性,29份為可疑樣本.可疑樣 本按說明書的規(guī)定重測后,有13份為陰性,5份為陽性,11份仍為可疑樣本.

由于樣本量和樣本的獲取等各種原因,只有PRNT檢測了其中11份可疑樣本中的5份(其中3份為陽性),72份陽性樣本中的70份(62份為陽 性). 另共有130份樣本不是用PRNT篩查,而是在疾控中心用CDC Dengue MAC ELISA檢測,共有9份不確定,4份可疑.再用PRNT重測,其中9份不確定樣本中有3份是陽性,4份可疑樣本中有2份為陽性. PRNT and CDC MAC ELISA具體統(tǒng)計見表7b.其中CDC MAC ELISA的13份可疑或不確定樣本由PRNT分類.

表7a：反應(yīng)樣品經(jīng)PRNT驗證的結(jié)果

表7b：反應(yīng)樣品經(jīng)CDC MAC Elisaa驗證

a: CDC MAC中的13個樣品仍為不確定或是可疑，終經(jīng)PRNT驗證劃分

陽性和陰性率的計算由PRNT和CDC MAC數(shù)據(jù)共同決定

陽性率：(63/75) 84.0% (95% CI: 73.9-90.8%)

陰性率：(121/137) 88.3% (95% CI: 81.8-92.8%)

此比率是PRNT和CDC MAC數(shù)據(jù)合并的結(jié)果，CDC MAC Elisa中的可疑或不確定的樣品（n=13）終經(jīng)PRNT劃分

研究中心3：

登革熱IgM Capture ELISA試劑盒特異性的評估在美國中西部的一間公共健康實驗室完成.此項研究采用了289份有登革熱癥狀樣本(2005-2008年期間收集) (其中136位個體并發(fā)患有西尼羅河病毒, 甲型肝炎,乙型肝炎,HIV, 落磯山斑點熱(RMSF), 軍團病或萊姆病).所有的檢測和診斷都在公共健康實驗室內(nèi)完成.所有的樣本均采自沒有爆發(fā)過登革熱疫性的美國中西部.基于這種歷史條件,因此所有個體均可 認為無登革熱病毒攜帶者.

經(jīng)過*次的檢測和可疑樣本的重測,終得到215份樣本為陰性,22份仍為可疑.52份樣本為陽性.74份(包括陽性的和可疑)樣本均用PRNT重測過,發(fā)現(xiàn)終的交叉反應(yīng)的原因歸咎于西尼羅河病毒.

表8：美國無疫情的樣品檢測結(jié)果

a:所有登革熱PRNT檢測到的陽性樣品的滴定量較低，被認定為是西尼羅河陽性血清，表明可能與登革熱PRNT發(fā)生了交叉反應(yīng)

b:注意：所有的假陽性和大量的可疑樣品僅僅是因為與西尼羅河陽性樣品間的交叉反應(yīng)

樣本可能會依據(jù)個人病情而進一步細分，例如，西尼羅河病毒的陽性個體可能與登革熱試劑盒發(fā)生了交叉反應(yīng)，結(jié)果見下表

表9：上述疑似發(fā)生了交叉反應(yīng)的樣品檢測結(jié)果

無其他疾病的陰性率：(100/101) 99.0% (95% CI: 94.1-100%)

除了西尼羅河病毒外地伴隨疾病的陰性率：(35/35) 100% (95% CI: 88.2-100%)

西尼羅河病毒的陰性率：(80/136) 58.8% ((95% CI: 50.4-66.7%)

35位個體未患有登革熱樣本(其中5份患有落磯山斑點熱(RMSF),2份患有軍團病,2份患有萊姆病,8份患有HIV,2份甲型肝炎,5份患有乙型肝炎,11份患有丙型肝炎)經(jīng)PANBIO登革熱IgM

Capture ELISA檢測試劑盒檢測沒有一份表現(xiàn)為陽性或可疑.

在136位個體未患有登革熱樣本但攜帶有西尼羅河病毒的樣本中,80份為陰性,16份為可疑,40份為陽性.

研究中心4

登革熱IgM Capture ELISA試劑盒特異性的評估是在美國南部的一間健康中心進行的.此次評估用了199份(從2004-2008期間收集)認為無登革熱癥狀的樣本.大部分 的病患有頭痛或發(fā)燒的癥狀,其他都表現(xiàn)出神經(jīng)系統(tǒng)方面的癥狀.初次檢測,183份樣本為陰性,10份為可疑,10可疑樣本經(jīng)重測后,其中有6份被檢測為陽 性. 再重測一次,10份可疑樣本均為陰性.

這199份樣本進一步用疾控中心用CDC Dengue IgM (MAC) ELISA檢測試劑盒重測,分類為陽性,陰性,可疑,不可解釋.終發(fā)現(xiàn)有16份樣本為無法解釋樣本. 這些可疑樣本用PRNT測則為陰性.如下表如示,用CDC Dengue IgM ELISA試劑盒檢測,總有1份樣本可疑,1份陽性.

表10：無疫情區(qū)的登革熱樣品檢測結(jié)果

陰性率：(191/197) 97.0% (95% CI: 93.4-98.7%)

研究中心5：

此次探究性研究采用55位具有癥狀表現(xiàn)的個體樣本(平均年齡在35.1年,樣本收集于2009年)均來自南美登革熱疫區(qū).樣本的2次訪問收集是 在4-14天(平均9天)采集,樣本均用登革熱IgM Capture ELISA 檢測試劑盒檢測.可疑樣本用同樣的試劑盒重測.同時用PRNT方法驗證第1次和第2次訪問的人群.在第1次和第2次之間訪問樣本的PRNT 4倍增長值表明有39位個體當(dāng)前具有登革熱癥狀.

表11：*次訪問采集的無疫情區(qū)的樣品檢測結(jié)果a

a:陽性率：(13/39) 33.3% (95% CI: 20.6-49.1%)

 陰性率：(15/16) 93.8% (95% CI: 69.7-100%)

b:PRNT陽性且*次和第二次收集的樣品之間增加值大于4倍

c:PRNT陽性且*次和第二次之間增加值小于4倍

第二次訪問個體(4-14天)的血清樣本的結(jié)果如下表所示,檢測的靈敏度隨第二次訪問的時間間隔而增加.

表12：第二次訪問采集的無疫情區(qū)的樣品檢測結(jié)果

a:陽性率：(31/39) 79.5% (95% CI: 64.2-89.5%) 

陰性率：(15/16) 93.8% (95% CI: 69.7-100%)

b:PRNT陽性且*次和第二次之間增加值大于4倍

c:PRNT陽性且*次和第二次之間增加值小于4倍

如“結(jié)果解釋”部分提到的，可疑樣品應(yīng)進行重復(fù)檢測，如果還是可疑樣品則需送去認證測試

回收率研究

五天內(nèi)在不同的三個地點,兩個不同的操作者完成對登革熱 IgM Capture ELISA檢測試劑盒可重現(xiàn)性研究實驗的評估.樣本(包括質(zhì)控)均同時采用三份檢測.實驗分別在佛羅里達州一間公共健康實驗室, PANBIO,在一家實驗室.此次研究實驗采用4份血清樣本(均按照相關(guān)規(guī)定稀釋).包括一份陰性樣本,一份剛低于可疑范圍的樣本,一份可疑樣 本,一份陽性樣本.血清樣本的稀釋均符合臨床相關(guān)要求檢測的濃度范圍.具體結(jié)果見下表.

表13：PANBIO公司登革熱試劑盒的再現(xiàn)性

所有值都用DENRA/NCA比值計算

Sx=標(biāo)準(zhǔn)劃分，如wr是板間試驗，DD不同天地試驗，OO不同操作者的試驗，SS不同地點的試驗

CV=變異系數(shù)

交叉反應(yīng)研究

用登革熱 IgM Capture ELISA檢測試劑盒檢測帶有幾種疾病(見下表)的血清樣本.樣本均采用雙份檢測.檢測得到陽性和可疑性的樣本采用一式三份重測.用血小板減少中和反應(yīng)檢 測陽性樣本是為了評估登革熱病毒的可暴露性.明顯的交叉反應(yīng)只在西尼羅河病毒中觀察到。

表14：交叉反應(yīng)

a:篩查其他含有特異性IgM抗體的樣品，與瘧疾IgM抗體的交叉反應(yīng)不能用PANBIO的登革熱檢測試劑盒評估

b:PRNT試驗中，鉤端螺旋體樣品與登革熱酶免試驗發(fā)生反應(yīng)，呈陽性（表格中不包括此結(jié)果，因為它不是真陽性樣品）

除掉三份血清樣品（一份西尼羅河陽性，一份乙腦陽性和一份鉤端螺旋體陽性）的其他128份樣品經(jīng)PRNT驗證后為陽性，24份篩查出的陽性或可疑樣品經(jīng)登革熱ELISA重測后，有12份西尼羅河陽性樣品，與西尼羅河的交叉反應(yīng)率為50%。

干擾研究：

四種干擾物質(zhì)對登革熱酶免試驗的影響。一份登革熱陰性和四份登革熱陽性樣品根據(jù)弱陽性到強陽性依次排列。四種干擾物質(zhì)為膽紅素，甘油三酯，血紅 蛋白，膽固醇。膽紅素不會對試驗產(chǎn)生影響，高濃度的甘油三酯對弱陽性血清有輕微影響，增大ISR值，血紅蛋白的高濃度和低濃度都會降低ISR值，膽固醇的 重復(fù)研究可得出多個結(jié)果，結(jié)果顯示膽固醇的兩個濃度都會影響DENRA的OD值，下表是相對于參考樣品，加入干擾物質(zhì)后ISR值的改變率

表15：加入干擾底物后ISR值的改變率

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