產(chǎn)品介紹
人萊姆病毒IgG(Lyme-IgG)ELISA檢測(cè)試劑盒
僅供科研使用
1、用途: 本試劑盒用于定性/定量檢測(cè)血清或血漿中抗萊姆氏IgG抗體, 可以檢測(cè)所有萊姆氏螺旋菌亞型的感染
2、簡(jiǎn)介: 萊姆病是一種蟬傳螺旋體感染性疾病。萊姆病的病原體為萊姆病螺旋體,能引起人類慢性游走性紅斑,以及心臟、神經(jīng)和關(guān)節(jié)等多系統(tǒng)受累的疾病,對(duì)人群健康危害較嚴(yán)重。萊姆病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要是血清學(xué)方法。本試劑盒采用特異性萊姆氏螺旋菌三個(gè)亞型的混合抗原進(jìn)行微孔板包被,具有較高的檢測(cè)靈敏度和特異性。
3、檢測(cè)原理:采用夾心ELISA方法,將萊姆氏螺旋菌抗原包被于微孔板底部,檢測(cè)時(shí),稀釋樣本及試劑盒質(zhì)控品加入微孔板,樣本中的抗萊姆氏螺旋菌IgG抗體與抗原結(jié)合,經(jīng)過孵育,洗滌,加入HRP標(biāo)記的抗人IgG二抗,在經(jīng)過孵育,洗滌后加入HRP酶的底物顯色劑TMB,終止顯色,酶標(biāo)儀讀板,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線或者Cutoff值判斷樣本的陰陽(yáng)性。
4、注意事項(xiàng)和預(yù)防措施
1) 此試劑盒僅用于體外診斷和專業(yè)人士使用。
2) 在檢測(cè)開始之前,仔細(xì)和完整的閱讀說明書,使用試劑盒提供的包裝插件的有效版本, 確保所有的程序都清楚。
3) 檢測(cè)時(shí)請(qǐng)不要使用已被損害的試劑,以確保自身安全。
4) 按照批號(hào)和有效期,不混合使用不同批號(hào)的試劑,也不要使用過期的試劑。
5) 遵守好的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)則和安全指南。穿實(shí)驗(yàn)服,帶橡皮手套,有必要時(shí)請(qǐng)戴護(hù)目鏡。
6) 此試劑盒中含有會(huì)傷害眼睛和皮膚的有害試劑。請(qǐng)閱讀材料來源和標(biāo)簽獲取詳細(xì)信息。
7) 根據(jù)國(guó)家生物有害物質(zhì)及安全條例,所有化學(xué)藥品和準(zhǔn)備或使用過的試劑都應(yīng)當(dāng)做有害物質(zhì)進(jìn)行處理。
8) 避免接觸終止液,以免刺激或著燒皮膚。
9) 試劑盒中的所有試劑(包括檢測(cè)過的人血清/血漿)對(duì)HIV/II,HbsAg和HCV都表現(xiàn)為陰性,但是試劑中會(huì)出現(xiàn)此類病毒(HIV/II,HbsAg和HCV)或其他具有感染性的病原體的可能性都不能*被排除.因此,所有的試劑在使用和處理的過程中都應(yīng)當(dāng)作潛在生物有害物質(zhì)進(jìn)行處理
5、貯存與穩(wěn)定性
試劑盒和運(yùn)輸環(huán)境和儲(chǔ)存環(huán)境溫度為2-8℃,避免熱源或太陽(yáng)直射。樣品的儲(chǔ)存與穩(wěn)定性及試劑的準(zhǔn)備將在相關(guān)章節(jié)中闡述。開封的包被板條在三個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定,前提是將包被板條用袋子密封并儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下。
6、樣品的采集與貯存
血清/血漿(EDTA抗凝)
微生物檢測(cè) |
瘦肉精三聯(lián)卡 |
萊克多巴胺快速檢測(cè)卡 |
試劑應(yīng)避免反復(fù)凍融。
操作步驟
在使用前將所有試劑和樣品平衡至室溫,并輕輕倒轉(zhuǎn)使其充分混勻。
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:
將10X的濃縮洗滌液稀釋,將120ml的濃縮洗滌液加上1080ml的蒸餾水,搖勻,至無任何沉淀,稀釋好的洗滌液多可在室溫下放置兩個(gè)星期。
準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)所需的板條,剩余的板條應(yīng)盡快放入袋子里重新密封,在2-8℃下儲(chǔ)存至保質(zhì)期。
7、試劑盒組份
1×12×8 | MTP | 包被板,可拆,微孔中包被了特異性抗原。 |
1×12mL | ENZCONJ | 酶聯(lián)結(jié)合物,綠色,即用性,HRP標(biāo)記的抗人IgG抗體 |
4×1.5mL | CONTROL A-D | A-D標(biāo)準(zhǔn)品: 含量為: 2; 10; 50; 200 U/mL,其中標(biāo)準(zhǔn)品B作為Cutoff標(biāo)準(zhǔn)品,內(nèi)含人抗萊姆氏螺旋菌IgG抗體,穩(wěn)定劑 |
1.5mL | CONTROL+ | 陽(yáng)性質(zhì)控,即用,內(nèi)含人抗萊姆氏螺旋菌IgG抗體,穩(wěn)定劑 |
1.5mL | CONTROL- | 陰性質(zhì)控,即用,內(nèi)含人血清和穩(wěn)定劑。 |
1×100mL | DILBUF | 稀釋用緩沖液,藍(lán)色,內(nèi)含磷酸緩沖液、去垢劑、BSA和穩(wěn)定劑 |
1×100mL | WASHBUF | 洗滌液(10×),內(nèi)含磷酸緩沖液、去垢劑和穩(wěn)定劑。 |
1×12mL | TMB SUBS | TMB底物液,即用,內(nèi)含TMB。 |
1×12mL | TMB STOP | TMB終止液,即用,含1M H2SO4 |
8、實(shí)驗(yàn)所需器材(但試劑盒不提供)
1) 移液器(Eppendorf移液器或類似儀器,CV<3%),體積為5μL;100μL;1000μL
2) 漩渦混勻器
3) 37℃孵箱
4) 樣品稀釋用試管(1mL)
5) 帶有儲(chǔ)器的8道移液器。
6) 洗滌瓶,自動(dòng)或半自動(dòng)的包被板洗滌設(shè)備。
7) 可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀(參考波長(zhǎng):600-650nm)
8) 雙蒸水或去離子水
9) 坐標(biāo)紙,取樣吸頭,記時(shí)器。
9、實(shí)驗(yàn)操作及注意事項(xiàng)
1) 樣品處理不合理或?qū)?shí)驗(yàn)操作進(jìn)行任何改動(dòng)動(dòng)都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。取樣體積、溫育時(shí)間、欲處理步驟都必須嚴(yán)格按說明進(jìn)行。只能使用標(biāo)準(zhǔn)移液器和標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備。
2) 一旦實(shí)驗(yàn)開始,所有的步驟都必須完整的進(jìn)行下去,不允許中斷。把所有試劑和樣品都拿到18-25℃的實(shí)驗(yàn)室中,在使用前,輕輕搖動(dòng)液體試劑和樣本,試劑混合過程中要避免氣泡。
3) 請(qǐng)勿接觸試劑、移液器、微孔/試管。加試劑和樣本時(shí),請(qǐng)使用新的取樣吸頭,以避免交叉污染。不用的試劑應(yīng)用蓋子蓋好,以免重復(fù)使用。
4) 用定標(biāo)儀對(duì)反應(yīng)板進(jìn)行校準(zhǔn)。
5) 溫育時(shí)間會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。微孔加樣的順序和時(shí)間都必須*。建議使用8道移液器加樣。
6) 包被板的清洗非常重要,微孔清洗不好將會(huì)形成錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。建議使用多道移液器或自動(dòng)微孔清洗設(shè)備進(jìn)行清洗。每次溫育間隔期間避免微孔干燥。加洗滌液和吸液時(shí)要避免碰到包被孔。清洗和加試劑時(shí)都應(yīng)特別小心。清洗時(shí),在微孔中精確的加入洗滌液緩沖液,同時(shí)確保無微孔中無殘?jiān)?/span>
7) 濕度會(huì)影響包被板,所以在未到達(dá)室溫時(shí)請(qǐng)勿打開包裝,未使用的包被板要重新密封于裝有干燥劑的包裝袋中。
8) 此實(shí)驗(yàn)也可以在自動(dòng)操作系統(tǒng)上進(jìn)行,具體信息請(qǐng)見“性能”。
10、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說明
10.1成分的準(zhǔn)備
稀釋/溶解 | 成分 |
| 稀釋液 | 比例 | 備注 | 貯存 | 有效期 |
100mL | 洗滌液 | 1000mL | 雙蒸水 | 1:10 | 有必要的話,加熱至18-25℃以溶解所有結(jié)晶 | 2-8℃ | 2-3月 |
10.2樣本稀釋
10.2.1 血清/血漿樣本
樣本 | 稀釋 | 試劑 | 比例 | 備注 |
血清/血漿 | 按一般規(guī)則稀釋 | 稀釋緩沖液 | 1:101 | 10 μL樣品 + 1 mL 稀釋緩沖液 |
樣品中IgG濃度高于高標(biāo)準(zhǔn)品含量的樣品必須進(jìn)一步稀釋,并重復(fù)檢測(cè)。
10.2.2 腦脊液樣本:按照Reiber法進(jìn)行腦脊液檢測(cè)時(shí),有必要用使血清和腦脊液具有相同的濃度或相同的Cutoff判別范圍(OD值為1-0.1),通過下面方式稀釋可以實(shí)現(xiàn):
樣本 | 稀釋 | 試劑 | 比例 | 備注 |
血清/血漿 | 按一般規(guī)則稀釋 | 稀釋緩沖液 | 1:401 | 5μL樣品 + 2 mL 稀釋緩沖液 |
腦脊液 | 按一般規(guī)則稀釋 | 稀釋緩沖液 | 1:4 | 50μL樣品 + 150μL 稀釋緩沖液 |
Cutoff值可以通過1:101稀釋參數(shù)來校正,1:401稀釋血清Cutoff值,稀釋度乘以4。1:4稀釋的腦脊液Cutoff值,稀釋度除以25。
如果檢測(cè)樣本的OD值在1.0和0.1之外,則應(yīng)通過下列稀釋后,再檢測(cè)
血清/血漿 | 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | 1:1600 |
腦脊液 | 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 | 1:32 |
11、實(shí)驗(yàn)步驟
1) 將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、稀釋樣本分別100μL加入包被板的微孔中。定性檢測(cè)只需加入標(biāo)準(zhǔn)品B。
2) 蓋板,37℃下溫育60min。
3) 棄取微孔內(nèi)反應(yīng)液,每孔用300ul的已稀釋好的洗滌液洗3次,在吸水紙上將板拍干。
4) 在每一微孔中加入100μL的二抗酶結(jié)合物。
5) 蓋板(新的粘性金屬板),37℃下溫育30分鐘。
6) 棄取微孔內(nèi)反應(yīng)液,每孔用300μL的已稀釋好的洗滌液洗3次,在吸水紙上將板拍干。
7) 如果可以的話,使用8道移液器加底物液和終止液。加底物液和終止液的時(shí)間間隔應(yīng)當(dāng)相同,使用自動(dòng)置換型移液器并避免氣泡產(chǎn)生。
8) 每孔加100μL TMB底物液
9) 18-25℃下避光溫育30min,
10) 每孔加100ulTMB終止液以終止底物反應(yīng)。加終止液后,60分鐘內(nèi)在450nm處測(cè)OD值(參比波長(zhǎng):600-650nm)
12、質(zhì)量控制
嚴(yán)格按照說明書操作所獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果才是有效的。使用者必須嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室優(yōu)化管理規(guī)定或其他的實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。按照質(zhì)控單的要求,所有的標(biāo)準(zhǔn)品濃度都必須允許范圍內(nèi)。如果其標(biāo)準(zhǔn)不符合要求,則實(shí)驗(yàn)無效,必須重做。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)使用已知濃度的樣品做進(jìn)一步的有效質(zhì)控。如果實(shí)驗(yàn)背離實(shí)際結(jié)果,應(yīng)檢查以下問題:試劑有效期,貯存條件,取樣器,實(shí)驗(yàn)設(shè)備,溫育時(shí)間,清洗方法。
13、結(jié)果計(jì)算:計(jì)算結(jié)果可作定性或者定量判斷
13.1 定性判斷:標(biāo)準(zhǔn)品B的OD值可以作為判斷陰陽(yáng)性結(jié)果的Cutoff值,樣本OD之在Cutoff值上下10%范圍內(nèi),則結(jié)果位于灰區(qū)內(nèi),判為可疑。如果高于灰區(qū)則判為陽(yáng)性,低于灰區(qū)則判為陰性。
典型例子:
Cut-off=OD(標(biāo)準(zhǔn)品B,臨界標(biāo)準(zhǔn)品)=0.45
樣本OD=0.60
臨界指標(biāo)(COI)=0.60/0.45=1.33。該樣本判定為陽(yáng)性
13.2定量判斷:在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上或用自動(dòng)生成的方法,以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸,濃度為X軸,繪制一標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。用立體圖、4參數(shù)對(duì)數(shù)圖或?qū)?shù)-對(duì)數(shù)圖都可獲得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,用標(biāo)準(zhǔn)品的每一單值進(jìn)行計(jì)算(樣品結(jié)果明顯異常的值必須刪除掉,應(yīng)使用更加合理的單值)。樣品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得。一旦樣品稀釋了,就應(yīng)當(dāng)乘以相應(yīng)的稀釋因子。如果樣品所測(cè)得的濃度高于高標(biāo)準(zhǔn),則應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說明所述對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,并重新檢測(cè)。
公司優(yōu)勢(shì):
1)質(zhì)量:我司提供的的試劑均經(jīng)過出廠檢測(cè)。產(chǎn)品質(zhì)量有保證。
2)價(jià)格:價(jià)格實(shí)惠,量大從優(yōu)。
3)服務(wù):提供完整的售前、售后和售中服務(wù)。售后到底。
除了人萊姆病毒IgG(Lyme-IgG)ELISA檢測(cè)試劑盒??我公司還提供:
食品安全快速檢測(cè)箱 |
黃曲霉毒素B1快速檢測(cè)卡 |
三聚氰胺快速檢測(cè)卡 |